Základní tipy pro kryokonzervaci buněčných kultur

Základní tipy pro kryokonzervaci buněčných kultur

Buňky pokračují ve svém metabolismu během normálních růstových činností, což vyžaduje účast různých proteáz. Když teplota klesne pod -70 ° C, proteázy přestanou fungovat. Proto v prostředí s extrémně nízkými teplotami mohou buňky zastavit své metabolické činnosti a vstoupit do spícího stavu, který umožňuje dlouhodobé skladování.

1. Experimentální materiály

Základní materiál:

Základní kultivační médium

Sérum (konvenční FBS/NBS)

UltraPure Workbench

Sterilní dimethylsulfoxid (DMSO)

STERILNÍ PBS PBS PHOSFÁLNÍ RÁDNÍ SOLT SOLT

Pipetting Gun

Elektrická pipetová pistole

Příprava experimentů

a) Příprava roztoku mrazu:

Obecné buňky: 55% bazálního média + 40% hovězí sérum (FBS/NBS) + 5% DMSO

Vitální buňky: 90% hovězí sérum (FBS/NBS) + 10% DMSO

Aliquot připravený roztok kryokonzervace do 15 ml odstředivé trubice [hnízda] a uložte při 4 ° C pro pozdější použití.

(b) Příprava buněk, které mají být zmrazeny:

Před zmrazením buněk vyberte buňky s dobrým stavem růstu a ve fázi logaritmického růstu a nahraďte je čerstvým médiem 12-24 hodin před zamrznutím, aby se udržel stav buněk.

2. Experimentální postup

1. Sledujte, že hustota buněk je zmrazena, což je asi 80%~ 90%. Použijte pipetovou pistoli k aspiraci starého média, přidejte sterilní PBS k mytí buněk 1-2krát a odstranění zbývajícího média v kulturním prostředí.

2. Přidejte vhodné množství trypsinu nebo trávicí šťávy, aby trypsin vstoupil do buněk a umístil je do inkubátoru pro trávení. Sledujte stav buněk pod mikroskopem: cytoplazma se zatahuje a buňky již nejsou připojeny do listů. V tomto okamžiku přidejte řešení stop a zastavte proces trávení.

3. Jemně bublinujte buňky špičkou za vzniku buněčné suspenze a odstřeďujte suspenzi buněk při 1000 ot / min po dobu 3-5 minut.

Zlikvidujte supernatant, přidejte vhodné množství roztoku mrazu a jemně pipetu, aby se buňky rovnoměrně počítaly. Upravte hustotu buněk pomocí kryokonzervačního média, aby byla konečná hustota 5 x 106/ml ~ 1 × 107/ml.

4. Použijte pipetovou pistoli k oddělení kryogenních zkumavek podle očekávané kapacity a k utěsnění a utěsňování použijte automatický omezený stroj.

5. The standard cryopreservation program is a cooling rate of -1°C to -2°C/min, and the cells to be frozen can be gradually frozen according to the following steps: room temperature → 4°C (20min) → - 20 ° C (30 minut) → -80 ° C ° C (přes noc) → Dlouhodobé skladování v kapalném dusíku.

Může být také skladován přímo do mrazničky při -80 ° C přes noc a poté přenesen do kapalného dusíku pro skladování.

Yongyue Medical je high-tech podnik specializující se na výzkum a vývoj, výroba a prodej biomedicínského spotřebního materiálu. Pipette tipy, pipety, PCR deska, produkty buněčné kultury a další biologické laboratorní spotřební materiál. Yongyue Medical si zaslouží vaši důvěru a volbu! Vítejte na konzultaci!