Podrobné vysvětlení těkavosti činidla v experimentech PCR

Podrobné vysvětlení těkavosti činidla v experimentech PCR.

V experimentu PCR po přidání reakčního systému pečlivě pokrýváme víko a opakovaně potvrzujeme, že víko je uzavřeno, aby se zabránilo těkavosti činidla. Ale někdy máme také pochybnosti: potvrdili jsme, že víko je pevně uzavřeno, ale po dokončení experimentu se činidlo stále odpařuje. jaký je důvod?

Ve skutečnosti je tětalilizace činidla jedním z nejčastějších problémů v experimentech PCR a existuje mnoho faktorů, které ovlivňují těkavosti činidla.

Odpařování se týká toho, že během experimentu PCR se reakční roztok vypařuje při vysoké teplotě a poté kondenzuje na stěně láhve nebo horního krytu za vzniku vodní mlhy nebo kapiček vody, nebo přímo přetéká ze vzduchové mezery uzávěru láhve nebo filmu, což má za následek při změně koncentrace reakčního roztoku. Změny, množství reakčního roztoku se snížilo a některé se dokonce odpařily na suchost, což vedlo k neplatným experimentům.

1. Tlak horkého víka, teplota

V experimentech PCR obvykle zahříváme víko, abychom zabránili kondenzaci páry činidla. Teplota zahřátého víka je obvykle vyšší než teplota reakčního roztoku, aby se zabránilo kondenzaci párů.

Tepelná víčka pro topení cykliků lze zhruba rozdělit do následujících čtyř typů: nenapadlací topná víčka, nastavitelná topná víčka, adaptivní topná víčka a automatická topná víčka. Nastavitelné vyhřívané víko má prstovou kompresi. Pokud nebude pevně zpřísněna, činidla se odpařují. Odpařování hrany lze minimalizovat zvýšením tlaku na vyhřívané víko. Někdy může přesměrování potlačit trubici a otočit knoflík. Za normálních okolností může elektrický inteligentní topné kryt automaticky detekovat spotřební materiál různých výšek, automaticky komprimovat spotřební materiál a tlak je jednotný a konstantní, čímž se snižuje odpařování činidla a manuální chyby a zlepšení experimentální přesnosti a opakovatelnost.

2. Deformace spotřebního materiálu

Pro úniky páry si většina lidí myslí, že tlak horkého víka nestačí. Tlak horkého víka je velmi důležitý, ale to je pouze jeden aspekt. Ve skutečnosti jsou spotřební materiály také velmi důležité.

PCR otvorové destičky jsou obvykle vyrobeny z plastových materiálů, které se po zahřátí výrazně rozšiřují a deformují. Rychlost tepelné roztažnosti kovové základny PCR používané k umístění destičky PCR otvoru je extrémně nízká a destička pro otvor PCR se po tepelné roztažení nemůže normálně rozšířit podél roviny. Vypouklý stav způsobuje, že horní tepelný pokryv není schopen plně kontaktovat povrch destičky PCR otvoru, což má za následek nerovnoměrnou teplotu a tlak, což způsobuje odpařování činidla na okraji destičky PCR otvoru a ovlivňuje účinek detekce PCR.

3. Spotřební materiál není pevně utěsněn

Těsnost tepelného víka a spotřebního materiálu neznamená, že uzávěr trubice PCR je pevně zavřený a kvalita destičky PCR studny je nerovnoměrná. Vysoce kvalitní spotřební materiál, povrch trysky a krytu jsou hladké a těsnění za krytem krabice je dobré a není snadné uniknout. Dolní spotřební materiál má nerovnoměrné výtoky a radiální linie, které mohou snadno způsobit únik nebo dokonce vyschnout.

Proto se v experimentech PCR pokuste vybrat vysoce kvalitní a vhodné spotřební materiál. Současně lze reakční systém rozšířit, aby se minimalizoval vliv odpařování systému na reakci.