Problémy s těsněním a kontaminací v destičkách s více buněčnými kulturami

Načítání a manipulace s vícebožnými buněčnými kultivačními destičkami:

Destička buněčné kultivace také sleduje princip přísné asepse při provádění buněčných operací. Všechny operace musí být standardizované a vědecké a nezpůsobí další dopad na růst buněk. Nejběžnějším problémem je, jak zajistit uniformitu buněk po přidání vzorku a minimalizovat dopad změny média na růstový stav buněk.

dotázat se:
Víka 96 a 24-jamkových kulturních desek nebo Petriho jídel jsou velmi volné, což je vhodné pro ventilaci, ale budou bakterie, plísně a další znečišťující látky vklouznout?

Odpovědět:
Víko je velmi volné, které patří do polootevřené kultury, a účelem toho je ventilovat (ve skutečnosti je to, aby se CO2 mimo kultivační misku plně vyměnil s kulturní miskou a udržoval hodnotu pH kultury střední).
Všechno má výhody a nevýhody, což samozřejmě zvyšuje možnost znečištění. Kromě toho to způsobuje, že se kapalina v misce vypařuje, což je pozoruhodné pro přesné dávkování léčiv. Proto jsou nutná následující dvě opatření: Vzduch v inkubátoru musí být čistý (pravidelné ultrafialové světlo, drhnutí alkoholu a inkubátor by měl být otevřen a uzavřen co nejméně) b. Vlhkost v inkubátoru musí být vždy udržována na 100% (umyvadlo se sterilní destilovanou vodou umístěnou v inkubátoru).
Stejně jako Petriho miska je to také kontejner s víkem vzhůru nohama a nebude znečištěna. Hlavně kvůli negativnímu tlaku proudu vzduchu generovaného „L“ okrajem krytu jsou k prachu připojeny mikroorganismy a prach přenášený proudem vzduchu nemůže projít okrajem krytu, který vytváří negativní tlak. Ventilační efekt je pouze prostřednictvím difúze vzduchu a nebude generován žádný proud vzduchu, takže jen dýchá a nepronikne bakteriemi.

dotázat se:
Pomocí 24-jamkové destičky existují operace v některých jamkách (v ultra čisté lavici) a existují buňky, které mají být kultivovány v jiných jamkách. Obávám se, že to způsobí kontaminaci. Nevím, na co mám věnovat pozornost?

Odpovědět:
Pokud je operace standardizována na lavičce s ultračitou lavicí, měla by být v pořádku. Myslím, že můžete plně využít kryt kultivační desky, pokusit se odhalit pouze otvory, které mají být provozovány, a zakrýt ostatní otvory kryty.
Před použitím zvažte komplexně a plně využívejte všechny otvory; Pokud potřebujete pouze použít několik otvorů, můžete použít pouze jednu stranu a zbytek zakryjte krytem. Nejprve jsem zvyklý používat pravou díru (je vhodné přidat vzorky k pravé ruce).

Při provozu použijte několik skleněných sklíčků ke zvednutí jedné strany desky, neotevřete kryt úplně, obecně žádný problém.
Nerovnoměrné rozložení buněk a řešení

dotázat se:
Buňky jsou naočkovány na kultivační desce a buňky se vždy shromažďují v periferní části, jak s ní řešit?

Odpovědět:
Mohu se zeptat, jak jsou vaše buňky smíšené? Je to pipety nebo třesení kultivační desky? Pokud se jedná o posledně jmenovaný a pokud je otřesena v kruhu, je velmi pravděpodobné, že buňky budou vyhozeny do periferní části kvůli odstředivé síle, což má za následek méně buněk uprostřed. Více než čtyři týdny!
Zde je dobrý způsob: před kultivací semenné desky vložte kultivační desku do inkubátoru na několik hodin nasycení a poté ji vyjměte. Síla by měla být při výsadbě buněk světlo. Přidání pomalu umožňuje proudění suspenze buněk do jamek destičky a kultivované buňky v podstatě rostou rovnoměrně. Nezapomeňte, že se nikdy třásněte třepačkou, jinak se vaše buňky shlukují, jak jste řekl.
Čím menší je průměr otvoru kultivační destičky, tím jasnější je tento jev. Tento jev je nevyhnutelný pro destičky 24 a 96-jamky, protože kapalina přidržuje stěnu tak, aby kulturní řešení ve studni netvořilo hladinu kapaliny, ale periferie je vysoká, stejně jako konkávní zrcadlo. Při použití těchto dvou druhů destiček pro otvor však není možné přidat dostatečné množství kultivačního řešení kvůli potřebě další intervence, aby se buňky objevily „sběr hran“ spolu s kulturním řešením. Záleží na tom, jaké indikátory musíte pozorovat. Pokud se jedná o MTT, imunohistochemie ovlivní výsledky v důsledku vrstvení buněk.
Při trávení buněk věnujte pozornost pipetům rovnoměrně, abyste se vyhnuli shlukům buněk, a množství kulturního řešení v jamce by mělo stačit. Obecně přidejte dostatek kulturního řešení při inokulaci a při přidání zásahu změňte řešení jednou. Množství kulturního řešení přidaného do intervenčního řešení se rovná množství kulturního řešení v době inokulace, v tomto případě se fenomén „sady okrajů“ zlepší, takže můžete také vyzkoušet.

dotázat se:
To, co jsem udělal, byl experiment formace plaku. Nejlepší je šířit buňky do jednotné vrstvy. Většina otvorů je v pořádku, když je virus inokulován, a některé z nich nejsou jednotné. Ve skupině buněk existují velké rozdíly. Chtěl bych se vás zeptat, jakou metodu používáte při přidávání buněk?

Odpovědět:
Po trávení je důležité potlačit buňky do jednobuněčné suspenze! Ujistěte se, že počet buněk v každé jamce je při rozdělení desky konzistentní!
Samozřejmě existují také faktory zpracování. Paralelismus mezi jamkami je také velmi důležitý. Například při přidávání léku smíchejte lék po zředění, abyste zajistili, že koncentrace každé jamky je konzistentní!
Kromě toho by při přidávání buněk a léčiv měla být testovací skupina a kontrolní skupina přidána, aby se zabránilo rozdílu v hustotě buněk a koncentraci léčiva způsobené sekvencí přidávání vzorků!

dotázat se:
Foukání je již jednotné, ale prkno, 6 otvorů a 24 otvorů jsou vždy poněkud nerovnoměrné a trochu se soustředí uprostřed. Navíc je zřejmé, že se počítání provádí, a po dni nebo dvou je hustota každé díry jiná, což ovlivní detekci. Existuje dobrý způsob?

Odpovědět:
Používáte -li pasterovou pipetu, nesmíte pokaždé příliš mnoho, protože buňky v pipetě se automaticky potopí, často je počet buněk v prvních několika dírách velký a buněčná zavěšení je často jednotná a kapalina bude vůle Sledujte trasu tvaru S.
Pokud používáte pipetu, měly by být špičky zpracovány a odstraněny, aby se zabránilo poškození buněk, takže pokaždé, když je kapalina odebrána, odpovídá studni. Je přesnější přidat nohou díru se špičkou. Ale také věnujte pozornost míchání suspenze.

Pro nastavení paralelní skupiny musí být N dostatečně velký (můžete ji vypočítat).

Po pokoření se netřesu, protože třepání způsobí agregování buněk směrem ke středu. Nejlepší je prkno jednou.

Porézní buněčná kultivační deska Yongyue Medical vždy považovala kontrolu kvality za život podniku a pokračovala v neustálém zlepšování podnikové konkurenceschopnosti. Společnost vždy dodržuje podnikového ducha dodržování zákonů a předpisů, je přísná se sebekázeňkou, je shovívavá a odváží se převzít odpovědnost jako standard v provozu, udržovat a rozšiřovat trh s vynikající kvalitou a vynikajícími službami a splnění potřeby zákazníků v největší míře. . Naším cílem rozvoje je win-win se zákazníky. Yongyue Medical! Váš důvěryhodný partner. Jsme ochotni s vámi upřímně spolupracovat na vytvoření lepší budoucnosti.